毒理檢測:基因突變試驗(yàn)方法有哪些?
發(fā)布時間:2021-07-22
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基因突變試驗(yàn)的研究已成為當(dāng)今生命科學(xué)研究的熱點(diǎn)之一,檢測方法也隨之迅速發(fā)展。人類細(xì)胞癌基因的突變類型已如上所述,對于基因突變試驗(yàn)檢測,1985 以前,利用Southern 印跡法,可以篩選出基因的缺失、插入和移碼重組等突變形式。對于用該法法不能檢測的突變,只能應(yīng)用復(fù)雜費(fèi)時的DNA 序列測定分析法。
基因突變試驗(yàn)?zāi)康氖菣z測產(chǎn)品對體外培養(yǎng)的哺乳動物細(xì)胞可否引起基因突變,以對產(chǎn)品的致突變性做出評價。那么常見的基因突變試驗(yàn)檢測方法有哪些?中科檢測帶你科普。
1、基因突變試驗(yàn)方法-焦磷酸測序法
測序法的基本原理是雙脫氧終止法,是進(jìn)行基因突變檢測的可靠方法,也是使用最多的方法。但其過程繁瑣、耗時長,靈敏度不高,對環(huán)境和操作者有危害,故在臨床應(yīng)用中存在一定的限制。
2、基因突變試驗(yàn)方法-單鏈構(gòu)象異構(gòu)多態(tài)分析技術(shù)
依據(jù)單鏈DNA在某一種非變性環(huán)境中具有其特定的第二構(gòu)象,構(gòu)象不同導(dǎo)致電泳的遷移率不同,從而將正常鏈與突變鏈分離出來。與測序法相比,靈敏性更高。
3、聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性分析技術(shù)
通過聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增出可能包含突變的基因組片段,然后利用限制性內(nèi)切酶對這些聚合酶鏈反應(yīng)片段進(jìn)行酶切,電泳檢測后根據(jù)酶切片段的長度差異來判斷是否存在突變位點(diǎn)。該法一般用于檢測已知的突變位點(diǎn)。
4、基因突變試驗(yàn)方法-探針擴(kuò)增阻滯突變系統(tǒng)
又稱等位基因特異聚合酶鏈反應(yīng),是利用Tap DNA聚合酶缺少3′到5′外切酶活性,聚合酶鏈反應(yīng)引物的3′端末位堿基必須與其模板DNA互補(bǔ)才能有效擴(kuò)增的原理。通過設(shè)計適當(dāng)?shù)囊镆詸z測突變基因。
5、基因突變試驗(yàn)方法-高分辨率溶解曲線分析技術(shù)
利用不同長度或不同堿基組成的DNA序列溶解曲線不同的原理,在聚合酶鏈反應(yīng)后直接運(yùn)行高分辨率溶解即可完成對樣品突變分析。該技術(shù)是一種靈敏度100%的表皮生長因子受體基因突變篩選技術(shù),可用于體細(xì)胞突變的檢測。
6、基因突變試驗(yàn)方法-高效液相色譜法
該方法是基于發(fā)生錯配的雜合雙鏈DNA與完全匹配的純合雙鏈DNA解鏈特征的差異而進(jìn)行檢測的,可檢測出含有單個堿基的置換、插入或缺失的異源雙鏈片段。與測序法相比,該法簡單、快速,不僅可用于已知突變的檢測,還可用于未知突變的掃描。但只能檢查有無突變,不能檢測出突變類型,結(jié)果判斷容易出錯。
7、基因突變試驗(yàn)方法-微數(shù)字聚合酶鏈反應(yīng)
該方法為將樣品作大倍數(shù)稀釋和細(xì)分,直至每個細(xì)分試樣中所含有的待測分子數(shù)不超過1個,再將每個細(xì)分試樣同時在相同條件下聚合酶鏈反應(yīng)后,通過基因芯片逐個計數(shù)。該方法為絕對定量的方法。
以上就是常見的基因突變試驗(yàn)檢測方法,如有毒理檢測、基因突變試驗(yàn)等項(xiàng)目問題,歡迎咨詢中科檢測。
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