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染色體畸變試驗的方法
發(fā)布時間：2021-09-10 425
　　染色體畸變是基因突變的一種形式，通常后果比較嚴重。可用外周血淋巴細胞，或人和哺乳動物體細胞系作為材料進行檢測，常用的體細胞系有中國地鼠卵巢細胞(CHO)，中國地鼠肺成纖維細胞(V79和CHL)，人胚肺2倍體成纖維細胞等。

 
染色體畸變試驗

 

　　一、染色體畸變試驗原理

 
　　外周血中小淋巴細胞幾乎都處在細胞增殖周期的G。期或G。期(不同于體外培養(yǎng)的體細胞)。一般條件下是不會再分裂的。當在培養(yǎng)物中加入適量的植物血凝素(phytohernagglu—tinin，PHA)，37℃培養(yǎng)52～72h后，淋巴細胞開始轉(zhuǎn)化，進入細胞增殖周期，此時可獲得大量的有絲分裂細胞。再經(jīng)過秋水仙素處理，低滲、固定，即可在顯微鏡下觀察到良好的中期染色體分裂象。電離輻射，化學有害物質(zhì)作用于機體或體外細胞，均可引起細胞染色體的損傷，且損傷與劑量(濃度)呈良好的線性關系。
 

　　二、材料與方法

 

　　(一)染色體畸變試驗材料

 
　　1．受試材料：外周血淋巴細胞。
 
　　2．RPMI 1640培養(yǎng)液，含20％小牛血清。
 
　　3．肝素：用生理鹽水配成500U／ml，4℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?/div>
 
　　4．秋水仙素：用0．85％生理鹽水配成40μg／ml濃度，過濾后4℃冰箱保存。
 
　　5．促細胞分裂劑：植物血凝素(PHA)。
 
　　6．KCl低滲液：配制75mmol／L KCl水溶液。
 
　　7．固定液(甲醇：冰醋酸=3：1)。
 

　　(二)染色體畸變試驗方法

 
　　1．受試物的處理實驗分組，至少設立五個組，即陽性對照、陰性(溶劑)對照及三個劑量組。zui高劑量和zui低劑量之間相差10倍，中間再設一個劑量，陽性對照物為已知的染色體斷裂劑，如C(mitomycin c，MMC)，劑量為o．02μg／ml；黃曲霉素毒素Bl，濃度為10-6 M等。每組中應設2～3個平行樣品。
 
　　2．外周血淋巴細胞培養(yǎng)常規(guī)培養(yǎng)。
 
　　3．收集細胞經(jīng)受試驗處理的細胞，培養(yǎng)開始后52～72h收集細胞。依不同受試物收集時問有所差異。
 
　　4．加入秋水仙素培養(yǎng)終止前4h于培養(yǎng)物中加入40μg／ml秋水仙素，終濃度為0．4～0.8μg／ml，37℃培養(yǎng)。
 
　　5．制片。
 
　　6．染色用(}iem∞染液染色15min，用自來水輕輕沖洗殘留染液，待干。
 
　　7．鏡檢先在低倍鏡下尋找分散良好的分裂象細胞，然后用高倍鏡觀察，進行染色體畸變計數(shù)，分析，分別記錄染色體畸變細胞數(shù)及各種類型染色體畸變細胞數(shù)，選擇良好的典型的染色體畸變圖進行顯微照相。
 

　　三、結(jié)果分析

 
　　1．染色體總畸變率及畸變率
 
　　總畸變率(％)=各種畸變類型數(shù)／分析細胞總數(shù)×100
 
　　畸變率(％)=染色體畸變數(shù)／染色體總數(shù)×100
 
　　2．畸變類型分析包括斷片(F)、雙著絲粒(D)、環(huán)(R)、互換(E)等，電離輻射常見斷片、雙著絲粒、環(huán)等，而化學毒物常見單體斷裂。
 
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